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pET28A怎么也诱导不出来目的蛋白

诱导表达没有目的蛋白产生原因无非两种一是诱导条件不适合目的蛋白的表达,可通过改变培养基,温度,诱导剂等条件重新摸索出合适的诱导条件。二是目的蛋白的菌种有问题,可通过涂板挑选单克隆菌落重新培养,或者质粒重新转化表达菌株等方法优化...

蛋白不表达的原因很多,有载体的原因,但肯不定不完全是载体的原因。 可以试试不同的表达菌株,诱导浓度,诱导温度,诱导时间等等。

1 可能是太弱你看不出来,建议用His抗体做个western 看看是不是有条带而看不出。 2 是不是融解性太差,建议将你的氨基酸序列做个疏水性分析。如果确实如此的话可能要重新构载体

用pet-32a做载体,自己本身的序列有44kda,表达的蛋白应该多大 1)噬菌体DE3溶源化的菌株如BL21(DE3)是最常用的表达菌株,噬菌体DE3是λ噬菌体的衍生株,构建好的表达载体可以直接转入表达菌株中,诱导蛋白的表达方式与lac启动子一样都是iptg诱导...

PET系列是IPTG诱导表达的,一般构建了PET表达载体导入表达宿主菌(BL21等),用LB培养基在37度液体培养到OD600值0.7左右的时候,加入终浓度为0.1-1.0mM的IPTG(浓度对诱导表达影响不是很大,对于PET系统,对IPTG浓度要求稍高,建议直接采用1mM)...

理论上影响是比较大的,原核LB培养不加抗生素的话,很容易出现丢失了带有外源基因质粒的生长速度比目的菌的生长速度快得多的情况。最后的结果就是影响目的蛋白的表达量。 所以如果这个蛋白表达培养的实验是第一次做的话,建议重做一遍以保证数据...

该空载体紧紧会表达一段Trx标签蛋白,加上his标签,约20kd左右,是高度可溶的。

理论上影响是比较大的,原核LB培养不加抗生素的话,很容易出现丢失了带有外源基因质粒的生长速度比目的菌的生长速度快得多的情况。最后的结果就是影响目的蛋白的表达量。 所以如果这个蛋白表达培养的实验是第一次做的话,建议重做窢范促既讵焕存...

加上前面的融合肽以及终止子之前翻译的一个肽段,最终表达的蛋白分子量是59KD左右

理论上影响是比较大的,原核LB培养不加抗生素的话,很容易出现丢失了带有外源基因质粒的生长速度比目的菌的生长速度快得多的情况。最后的结果就是影响目的蛋白的表达量。 所以如果这个蛋白表达培养的实验是第一次做的话,建议重做一遍以保证数据...

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